Haemozoin Detection in Mouse Liver Histology Using Simple Polarized Light Microscope

The presence of malarial pigment (haemozoin) due to Plasmodium infection is a common histopathological effect in mouse liver. Previous research showed that by using a polarized light microscope, researchers were better able to detect haemozoin in mouse liver histology section. Thus, the aim of this research was to compare the haemozoin area observed by a conventional vs. simple polarized light microscope by using image processing analysis. A total of 40 images produced from both conventional light microscope and simple polarized light microscope were collected. All images were analyzed using ImageJ 1.47 software to measure the haemozoin areas. Our results showed that non birefringent haemozoin and birefringent haemozoin area was significantly different. This was because when using conventional light microscope the brown area that contained images of non birefringent haemozoin images also contained Kupffer cells which appeared as the same brown color as haemozoin. In contrast, haemozoin gave bright effect and can be easily differentiated with Kupffer cells in the birefringent haemozoin images. This study concluded that haemozoin detection in mouse liver histology using a simple polarized light microscope was more accurate compared to that of conventional light microscope

Liver Histophatological Studies of Mice (Mus musculus sp.) Infected With Gamma Rays Irradiated Plasmodium berghei Strains Anka

Malaria is a serious global disease and a leading cause of morbidity and mortality in tropical and sub-tropical countries. Radiation attenuated vaccines have been demonstrated to be an effective means of controlling certain parasitic infections such as malaria. Our previous research showed that irradiation dose of 150-175 Gy to Plasmodium berghei were enable to suppress the infected erythrocyte cells and irradiation dose at 150 Gy was more effective compared to 175 Gy in attenuate the parasites based on parasitemia index. Aim of this research was to investigate the most suitable irradiation dose to attenuated P. berghei based on the the histological changes in the liver mouse malaria model. Histological changes in mice liver because of Plasmodium is congestion in the sinusoids and masses of hemozoin. Fourty Swiss mice were randomly assigned to four equal groups. First group of mice were inoculated with the unirradiated malaria parasites as a positive control while negative control group represented uninfected normal control. The third group of mice was inoculated with the irradiated malaria parasites with dose 175 Gy. Last group were inoculated with the irradiated malaria parasites with dose 150 Gy. Mice were sacrificed at day 6, 8, 12, 16, 20, and 24 post inoculation for liver histological study. Their livers processed for histomorphometric assessment of sinusoidal area, haemozoin area and hepatosomatic index as a quantitative measure of altered morphology. Hepatic sinusoidal area in mice infected with the unirradiated malaria parasites increased by 104% in day 24 post inoculated compared to day 6 post inoculated, whereas a smaller increase of 46% occurred in mice that were inoculated with the irradiated malaria parasites with dose 150 Gy. The difference between positive control and 150 Gy group was significant (P 0.05). For hepatosomatic index (HSI) at day 24 post inoculation the HSI value in group 150 Gy (5.33) was the smallest compared to other groups. Based on our research it can be concluded that irradiation dose at 150 Gy was more effective compared to 175 Gy in attenuate the parasites based on assessment of sinusoidal area, and HSI value at 24 day post inoculation

EVALUASI HUBUNGAN DOSIS RADIASI TERHADAP KERUSAKAN DNA SEL LIMFOSIT DENGAN MENGGUNAKAN TES COMET

EVALUASI  HUBUNGAN DOSIS RADIASI TERHADAP  KERUSAKAN DNA SEL LIMFOSIT DENGAN MENGGUNAKAN TES COMET. Kerusakan asam nukleat (DNA) akibat radiasi atau faktor lain dapat mengarah ke efek yang lebih parah seperti sel kanker. Oleh karena itu diperlukan suatu metode deteksi untuk mengetahui besarnya kerusakan tersebut antara lain dengan metode uji komet yang sederhana. Tujuan penelitian ini adalah mengkaji efek radiasi pada sel limfosit akibat radiasi melalui teknik uji komet. Spesimen darah diiradiasi dosis gamma 2-8 Gy kemudian diisolasi limfositnya dengan histopaque. Isolat limfosit diproses  uji komet pada slide dalam kondisi alkali dan hasil pencitraan dianalisis dengan software khusus. Hasil menunjukkan bahwa terdapat korelasi positif parameter komet dengan dosis radiasi, semakin besar dosis paparan semakin besar kerusakan DNA. Diantara parameter uji komet, tail DNA memberikan korelasi yang terbaik dengan dosis radiasi. Disimpulkan bahwa uji komet sangat baik digunakan untuk mengetahui kerusakan DNA akibat radiasi

Efek Vaksinasi Berulang Plasmodium berghei Radiasi dalam Menginduksi Kekebalan Humoral dan Proteksi pada Mencit (Mus musculus) Swiss Webster

Radiasi gamma dapat digunakan untuk melemahkan parasit. Parasit yang lemah memberikan kesempatan bagi inangnya untuk mengembangkan respon imun yang mampu mengatasi penyakit paska infeksi. Antibodi merupakan komponen kekebalan tubuh yang berperan dalam respon imun humoral. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh imunisasi berulang dan uji tantang terhadap respon antibodi dan pertumbuhan parasit. Penelitian ini menggunakan rancang acak dengan 60 ekor mencit Swiss Webster yang dibagi menjadi 3 kelompok dan dilakukan selama 62 hari. Dosis radiasi yang digunakan adalah 150 Gy, 175 Gy, dan kontrol positif (0 Gy), dosis imunisasi dengan 1 x 107 parasit diradiasi per ml. Imunisasi ulang dilakukan 1 dan 2 minggu setelah imunisasi pertama.  Uji tantang dilakukan satu bulan setelah imunisasi pertama. Pertumbuhan parasit diamati setiap dua hari dan pengamatan respon antibodi diamati pada hari ke - 8, 15, 40, 47, dan 62. Hasil yang diperoleh adalah, konsentrasi antibodi mencit diimunisasi dengan dosis 175 Gy meningkat hingga 3 kali setelah imunisasi kedua, pertumbuhan parasit relatif rendah, dan 60% mencit tetap sehat hingga hari ke 62. Dapat disimpulkan bahwa imunisasi ulangan P. berghei yang diradiasi 175 Gy dapat meningkatkan konsentrasi antibodi, menekan pertumbuhan parasit, mencegah manifestasi gejala klinis dan mencit tetap sehat sampai hari ke – 62

Lymphocyte Proliferation Kinetics in Inhabitant of Takandeang Village, Mamuju: A High Background Radiation Areas in Indonesia

BACKGROUND: Mamuju area in West Sulawesi considered as the high natural background radiation area in Indonesia. Our previous study showed that the mean mitotic index (MI) and nuclear division index (NDI) in lymphocytes of Botteng Village, Mamuju inhabitants was lower compared to control samples. To validate our previous study results, here in this study the evaluation of cell proliferation markers which were MI and NDI in peripheral blood lymphocytes (PBL) of Takandeang Village inhabitants was conducted.METHODS: A total 60 people were enrolled in this study, consisted of 35 samples from Takandeang Sub-Village and 25 from normal background radiation area. MI was calculated manually and automatically using Metafer 3.11.2 imaging system. The NDI defined as proportion of mononucleated, binucleated, trinucleated and tetranucleated cells were conducted using cytokinesis block micronucleus (CBMN) assay.RESULTS: The results of this study showed that the mean manual MI in Takandeang Sub-Village inhabitants was lower compared to control group (4.96±2.25 vs. 5.93±2.14). In contrast, the mean automatic MI (20.37±10.49 vs. 18.87±7.49) and NDI (1.555±0.174 vs. 1.523±0.112) in Takandeang Sub-Village inhabitants was higher compared to the control group. Statistical analysis revealed that the difference of mean manual MI, automatic MI and NDI in Takandeang Sub-Village inhabitants was not significantly different compared to the control group(p>0.05).CONCLUSION: It can be concluded that based on this study the chronic low radiation dose exposure in Takandeang Sub-Village, Mamuju has no significant effect on the lymphocytes proliferation.KEYWORDS: lymphocytes, mitotic index, nuclear division index, high background radiatio

ANALISIS KERUSAKAN DNA PADA SEL LIMFOSIT PASIEN PASCA-RADIOTERAPI

Analyses of DNA Damage in the Patient’s Lymphocyte Cells Post-Radiotherapy Radiotherapy given in high doses to kill cancer cells can also induce DNA damage in surrounding normal cells. The radiation dose is divided into smaller doses called fractionation to decrease the effect of radiation on normal tissue. For this reason, it is necessary to monitor the peripheral blood lymphocytes to evaluate the patient's DNA damage. The alkaline comet test is a simple and sensitive technique for detecting DNA instability. This study involved 11 patients who underwent radiotherapy up to 20 Gy, and 11 healthy subjects as controls. This study aims to see how much DNA damage is caused by a 20 Gy fractionated radiation dose in patients with various cancers. The results showed that the mean frequency of damaged cells in patients was 80.54 ± 12.52% with a mean comet tail length of 49.98 ± 12.93 µm. There was a significant difference in both the frequency of damaged cells and the mean value of the comet tail length against the control group (p < 0.001). It was concluded that high doses of radiation can cause DNA damage to peripheral blood lymphocytes. Radioterapi yang diberikan dalam dosis tinggi untuk mematikan sel kanker juga dapat menginduksi kerusakan DNA pada sel normal di sekitarnya. Dosis radiasi dibagi menjadi dosis yang lebih kecil yang disebut fraksinasi untuk menurunkan efek radiasi pada jaringan normal. Untuk itu perlu pemantauan pada limfosit darah tepi untuk mengevaluasi kerusakan DNA pasien. Uji komet alkali merupakan teknik yang sederhana dan sensitif untuk mendeteksi ketidakstabilan DNA. Penelitian ini melibatkan 11 pasien yang menjalani radioterapi hingga 20 Gy, dan 11 subyek sehat sebagai kontrol. Penelitian ini bertujuan untuk melihat seberapa besar kerusakan DNA akibat dosis radiasi fraksinasi 20 Gy pada pasien dengan variasi kanker. Hasil penelitian menunjukkan bahwa rerata frekuensi sel yang rusak pada pasien 80,54 ± 12,52% dengan rerata panjang ekor komet 49,98 ± 12,93 µm terdapat perbedaan nyata baik pada frekuensi sel yang rusak maupun nilai rerata panjang ekor komet terhadap kelompok kontrol (p < 0,001). Penelitian ini menyimpulkan bahwa radiasi dosis tinggi dapat menyebabkan kerusakan DNA sel limfosit darah tepi

HJSTOPATOLOGI HATI DAN LIMPA MENCIT PASCA IMUNISASI BERULANG DAN UJI TANTANG DENGAN Plasmodium berghei IRADIASI GAMMA STADIUM ERITROSITIK

HISTOPATOLOGI HATI DAN LIMPA MENCIT PASCA IMUNISASI BERULANG DAN UJl TANTANG DENGAN Plasmodium berghei IRADIASI GAMMA STADIUM ERITROSITIK. Pengembangan vaksin malaria merupakan hal yang cukup penting saat ini seiring dengan meningkatnya resistensi plasmodium terhadap obat anti malaria. Salah satu cara untuk melemahkan plasmodium sebagai parasit penyebab malaria dalam pengembangan vaksin malaria adalah dengan menggunakan radiasi sinar gamma. Beberapa penelitian sebelumnya memperlihatkan bahwa dosis radiasi sinar gamma 175 Gy lebih efektif dalam melemahkan Plasmodium berghei stadium eritrositik dibandingkan dengan dosis 150 Gy. Tujuan penelitian yang dilakukan adalah untuk mengetahui efektivitas dosis irradiasi 175 Gy berdasarkan pemeriksaan gambaran histologi organ hati dan limpa mencit pasca imunisasi berulang (booster) dan uji tantang dengan menggunakan P. berghei irradiasi 175 Gy. Sebanyak 10 ekor mencit (satu ulangan) diinfeksi dengan P. berghei 1x107 stadium eritrositik iradiasi 175 Gy. Hari ke 7 dan 14 mencit diinfeksikan kembali dengan 1x107 P. berghei stadium eritrositik yang  telah diiradiasi 175 Gy. Hari ke 8 dan ke 16 mencit dibunuh dan diambil organ hati dan limpa   untuk dibuat preparat histologinya. Mencit yang tersisa kemudian dipelihara hingga hari ke 40 (satu hari sebelum uji tantang) dan dibunuh satu ekor mencit dan diambil organ hati dan limpanya untuk dibuat preparat histologinya. Hari ke 41 dilakukan uji tantang yaitu dengan menginfeksikan P. berghei yang tidak diiradiasi sebanyak 1x105 terhadap dua ekor mencit yang tersisa. Enam hari pasca uji tantang satu mencit dibunuh untuk  dibuat  preparat  hitologi  hati dan  limpa. Terakhir pada dua puluh satu hari pasca uji tantang mencit dibunuh untuk dibuat preparat histologi hati dan limpanya. Hasil penelitian memperlihatkan bahwa terjadi perbaikan pada struktur hati dan limpa mencit pasca uji tantang. Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa imunisasi berulang (booster)  dengan P.berghei stadium eritrositik iradiasi 175 Gy memberikan respon imun yang lebih baik pada mencit